蛋白A（Protein A） 殘留檢測(cè)試劑盒
- 別名：殘留蛋白A檢測(cè)試劑盒 Protein A ELISA kit 蛋白A（Protein A） 殘留檢測(cè)試劑盒
- 編碼：DDM1416A
- 級(jí)別：
- 簡(jiǎn)介：抗體類(lèi)藥物生產(chǎn)時(shí)多用到的蛋白A（Protein A）親和層析填料，不可避免會(huì)有蛋白A配基脫落，導(dǎo)致抗體藥物中蛋白A的殘留污染。本試劑盒既可檢測(cè)天然的protein A，也可檢測(cè)重組的protein A如MabSelect SuRe等，適用于定量分析生物藥物中蛋白A雜質(zhì)。
基礎(chǔ)信息
| 靈敏度 | LOD 10pg/ml, LOQ 10pg/ml |
| 線(xiàn)性 | 在[10-3000]pg/mL的測(cè)量范圍內(nèi)，r≥0.9900 |
| 回收率 | 80%-120% |
| 批間差 | ≤10% |
| 特異性 | 既可檢測(cè)天然的protein A,也可檢測(cè)重組的protein A |
| 應(yīng)用 | 適用于定量分析生物藥物中蛋白A雜質(zhì) |
產(chǎn)品介紹
簡(jiǎn)介
抗體類(lèi)藥物生產(chǎn)時(shí)多用到的蛋白A（Protein A）親和層析填料，不可避免會(huì)有蛋白A配基脫落，導(dǎo)致抗體藥物中蛋白A的殘留污染。本試劑盒既可檢測(cè)天然的protein A，也可檢測(cè)重組的protein A如MabSelect SuRe等，適用于定量分析生物藥物中蛋白A雜質(zhì)。
優(yōu)勢(shì)
通常情況下，蛋白A會(huì)與待測(cè)樣品中的單克隆抗體形成復(fù)合體從而影響準(zhǔn)確的蛋白A測(cè)定，與傳統(tǒng)方法相比，本試劑盒無(wú)需樣品預(yù)處理步驟，即可檢測(cè)從IgG中分離的蛋白A，實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單易操作，且耗時(shí)短。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)測(cè)定樣品中proteinA的含量。包括校準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋液，
Biotin標(biāo)記的檢測(cè)抗體，清洗液，雙組分TMB顯色液，終止液，預(yù)包被酶標(biāo)板，封板膜。
使用方法
試劑準(zhǔn)備
1.本試劑對(duì)水份敏感，在開(kāi)瓶前，需將各組分小瓶平衡至室溫，以避免容器內(nèi)的水份冷凝。
2.清洗液的配制：用蒸餾水或純化水10倍(1:9)稀釋試劑E 清洗液(10X),配制實(shí)驗(yàn)用清洗液。長(zhǎng)期使用可放于2℃~8℃保存，效期3個(gè)月。
3.設(shè)置酶標(biāo)儀，讀取波長(zhǎng)450nm/630nm的雙波長(zhǎng)。
4.顯色液的配制：雙組份TMB顯色液由兩部分組成：組分A(含H2O2)和組分B(含TMB),分瓶包裝，臨用前按1:1混合后使用。
5.校準(zhǔn)品的配制：檢測(cè)含有天然或重組Protein A樣品時(shí)，請(qǐng)參照下表稀釋步驟配制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)：3000.00pg/mL、1500.00pg/mL、800.00pg/mL、320.00pg/mL、128.00pg/mL、51.20pg/mL 、20.48pg/mL、0.00pg/mL。
校準(zhǔn)品名稱(chēng) | 移取 | 加入至 | 配成重組Protein A濃度 |
濃溶液 | 10μL的3μg/mL試劑A校準(zhǔn)品 | 990μL的試劑B稀釋液，混勻 | 30ng/mL |
校準(zhǔn)品H | 40μL的30ng/mL校準(zhǔn)品 | 360μL的試劑B稀釋液，混勻 | 3000.00pg/mL |
校準(zhǔn)品G | 200μL的校準(zhǔn)品H | 200μL的試劑B稀釋液，混勻 | 1500.00pg/mL |
校準(zhǔn)品F | 200μL的校準(zhǔn)品G | 175μL的試劑B稀釋液，混勻 | 800.00pg/mL |
校準(zhǔn)品E | 150μL的校準(zhǔn)品F | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 320.00pg/mL |
校準(zhǔn)品D | 150μL的校準(zhǔn)品E | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 128.00pg/mL |
校準(zhǔn)品C | 150μL的校準(zhǔn)品D | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 51.20pg/mL |
校準(zhǔn)品B | 150μL的校準(zhǔn)品C | 225μL的試劑B稀釋液，混勻 | 20.48pg/mL |
校準(zhǔn)品A | 150μL的試劑B稀釋液 | 0.00pg/mL |
6.樣品的配制：
通常情況下，Protein A會(huì)與待測(cè)樣品中的抗體形成復(fù)合體，而高濃度IgG會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，從而影響Protein A的準(zhǔn)確測(cè)定。因此在測(cè)定Protein A之前應(yīng)當(dāng)進(jìn)行樣品稀釋。推薦用試劑B稀釋液，將樣品稀釋至0.1-1.0mg/mL的蛋白濃度，可嘗試將樣品10-50倍稀釋?zhuān)蛳♂屩翙z測(cè)線(xiàn)性范圍的濃度進(jìn)行檢測(cè)，稀釋完的樣品體積應(yīng)不少于150μL。
未提供的必需品
1.具有450nm和630nm雙波長(zhǎng)檢測(cè)功能的酶標(biāo)儀。 (如果酶標(biāo)儀不能提供雙波長(zhǎng)分析，也可以?xún)H在450nm波長(zhǎng)下讀取)。
2.移液器5-200μLg
3.多通道移液器100μL。
4.蒸餾水或純化水。
5.用于稀釋清洗液的500mL容器。
檢測(cè)操作步驟
1.取所需數(shù)量的組份H預(yù)包被酶標(biāo)板條固定于板架上；向孔中加入校準(zhǔn)品/待測(cè)樣品，每孔50μL,每個(gè)濃度兩個(gè)重復(fù)；
2.輕輕震蕩混勻，貼上組份I封板膜，20-25℃振蕩(500rpm)孵育60分鐘；
3.洗板：甩凈孔中液體，在各反應(yīng)孔中加入稀釋后的實(shí)驗(yàn)用清洗液(由試劑E清洗液稀釋后配制),每孔300μL,停留5秒鐘后甩去孔中液體，重復(fù)3次，最后一次甩凈拍干。機(jī)洗：每孔中注液量為每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
4.加入試劑C Biotin標(biāo)記的檢測(cè)抗體，每孔100μL；
5.輕輕震蕩混勻，貼上組份I封板膜，20-25℃振蕩(500rpm)孵育60分鐘；
6.洗板：甩凈孔中液體，在各反應(yīng)孔中加入稀釋后的實(shí)驗(yàn)用清洗液(由試劑E清洗液稀釋后配制),每孔300μL,停留5秒鐘后甩去孔中液體，重復(fù)3次，最后一次甩凈拍干。機(jī)洗：每孔中注液量為每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
7.加入試劑D鏈霉親和素-辣根過(guò)氧化物酶復(fù)合物，每孔100μL；
8.輕輕震蕩混勻，貼上組份I封板膜，20-25℃振蕩(500rpm)孵育30分鐘；
9.洗板：甩凈孔中液體，在各反應(yīng)孔中加入稀釋后的實(shí)驗(yàn)用清洗液(由試劑E清洗液稀釋后配制)每孔300μL,停留5秒鐘后甩去孔中液體，重復(fù)3次，最后一次甩凈拍干。機(jī)洗：每孔中注液量為每孔300μL,洗板3次，最后一次拍干；
10.顯色：加入試劑F顯色液，每孔100μL,20-25℃,避光孵育8分鐘；
11.終止：加入試劑G終止液，每孔100μL,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立刻轉(zhuǎn)為黃色);
12.測(cè)定：用酶標(biāo)儀在450nm/630nm雙波長(zhǎng)下，讀取各孔的吸光值(O.D.值),如果酶標(biāo)儀不提供雙波長(zhǎng)分析，可以?xún)H在450nm波長(zhǎng)下讀取，測(cè)定應(yīng)在加入終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。
結(jié)果分析與計(jì)算
1.校準(zhǔn)品、待測(cè)樣品均做2個(gè)重復(fù)，取其平均值。
2.用酶標(biāo)儀的自帶軟件(通常是四參數(shù)邏輯曲線(xiàn)擬合)或使用能夠生成四參數(shù)邏輯擬合(log-4PL)的計(jì)算機(jī)軟件制作校準(zhǔn)品劑量-反應(yīng)曲線(xiàn)的回歸方程，再根據(jù)待測(cè)樣品的O.D.值從回歸曲線(xiàn)上返算出樣品中待測(cè)物的濃度。
3.請(qǐng)勿使用線(xiàn)性回歸分析來(lái)推導(dǎo)樣品濃度，避免導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)。
4.含有大于3000pg/mL的Protein A樣品需用所提供的試劑B稀釋液稀釋后測(cè)定。計(jì)算結(jié)果時(shí)，需將稀釋后的樣品濃度乘以稀釋倍數(shù)。
質(zhì)量指標(biāo)
MSDS
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